Production et purification des protéines

Responsable de la plateforme : Nicolas BAUMBERGER

Description

La résolution de nombreuses questions en biologie nécessite de pouvoir disposer de protéines pures, homogènes et fonctionnelles en quantité suffisante. Répondre à cet objectif requiert généralement l’utilisation de systèmes d’expression hétérologues procaryotes ou eucaryotes en association aux techniques d’ADN recombinant.

La plateforme P3P offre ses services et ses équipements spécialisés aux équipes de recherches pour faciliter et accélérer la production et la purification des protéines recombinantes désirées, quelque soit l’utilisation finale envisagée (immunisation, analyse enzymatique, test d’interaction, détermination de structure).

Pour cela, la plateforme maintient et met à disposition des chercheurs des collections de souches bactériennes, des lignées cellulaires et des vecteurs pour l’expression hétérologue. Elle regroupe en un lieu unique les équipements de cultures, de casse cellulaire et de chromatographie, les entretient et forme les utilisateurs à leur usage. Elle propose son expertise dans la planification et la réalisation des projets ou, alternativement, produit et purifie les protéines pour le compte des équipes.

Enfin elle assure la veille technologique, teste et implémente, en les adaptant aux besoins locaux, les innovations dans le domaine des protéines recombinantes.

Expertises

Expression des protéines recombinantes en systèmes procaryotes

  • Développement et maintenance de collections de vecteurs pour l’expression simple ou la co-expression des protéines dans E. coli (techniques de clonage modulaire Gateway ou GoldenGate.)
  • Test et optimisation de l’expression par screening :
    • Conditions de culture
    • Etiquettes de solubilité/affinité
    • Souches bactériennes spécialisées
  • Production en flasques jusqu’à 12L de cultures

Expression des protéines recombinantes en systèmes eukaryotes (cellules d’insecte/Baculovirus)

  • Génération de virus recombinants par système Bac-to-Bac ou co-transfection directe
  • Amplification de titre viral
  • Production en cellules Sf21 en suspension

Purification des protéines

  • Préparation des échantillons : lyse cellulaire par sonication, French press ou méthodes enzymatiques ; clarification par centrifugation, ultracentrifugation, filtration.
  • Purification sur systèmes FPLC de dernière génération sous logiciel UNICORN: chromatographie bidimensionnelle, méthodes de scouting, multi-échantillons, protocoles complexes.
  • Chromatographie d’affinité, chromatographie d’échange ionique, chromatographie d’interactions hydrophobes, chromatographie par filtration sur gel. Divers format de colonnes.
  • Analyse qualité : SDS-PAGE, western-blot, filtration sur gel rapide, diffusion de lumière dynamique (DLS).
  • Optimisation de stabilité par thermal shift assay

Membres de la plateforme

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